T細胞在體內持久性

臨床試驗中檢測T細胞在體內存活時間的方法主要有反轉錄PCR法TCR基因掃描、 MHC-肽四聚體染色法、實時熒光定量PCR和流式細胞分析技術。

同一克降T細胞重排后其互補決定區3(CDR3)的長度和序列完全相同，而不同克隆T細胞有所不同，因此分析TCR CDR3的長度和序列，可以作為判別t細胞克降性的指標，通過分析TCRVβ亞家族的分布及克隆特點，可對特定克隆亞群細胞進行分析;T細胞通過特異性TCR識別由MHC分子提呈的抗原肽，因此可用熒光標記的MHC-肽復合物檢測抗原特異性T細胞。Altman等首次發明此方法并應用于檢測可識別HIV抗原肽的特異性CTL，獲得成功。該方法具有迅速、直接、靈敏且特異性強的優點，比傳統 CTL有限稀釋法敏感性高10100倍;實時熒光定量pCr是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法，基于引物和探針的靶向和放大CAR-T或TCR-T的編碼DNA，通過與陽性對照組DNA相比較，可定量檢測基因轉染的t細胞;流式細胞分析技術(flow cytometiy)是借助流式細胞儀對細胞進行快速準確的鑒定和分類的技術，利用偶聯不同熒光抗體標記不同的細胞表面分子，再依據不同的細胞表面分子區分細胞亞群，或者通過分析細胞表面或細胞內蛋白的表達情況，評價細胞功能。

早期臨床試驗，主要利用反轉錄PCR法TCR基因掃描技術檢測TIL克隆或選擇抗原特異性T細胞。目前，MHC-肽四聚體染色法被越來越多用于檢測表達特定抗原表位的T細胞，抗原可以是高表達抗原、分化抗原、腫瘤-睪丸抗原和新抗原。一旦確定了T細胞的抗原表達信息，就可以利用反轉錄PCR法TCR基因掃描技術或MHC-肽四聚體染色技術分析回輸的T細胞在體內的增殖和存活時間。

在CAR-T和TCR-T臨床試驗中，主要利用實時熒光定量PCR和流式細胞分析技術定性和定量分析T細胞。大多數CAR-T臨床試驗利用熒光定量PCR技術檢測T細胞在外周血、腫瘤組織或骨髓中的存在情況。利用流式細胞術檢測的優點在于可同時檢測T細胞的多個參數，如可同時檢測CAR-T細胞上其他如分化、激活或耗竭相關表面分子的表達情況流式細胞儀和熒光定量PCR在檢測外周血中的CAR-T時具有同樣的敏感性。熒光定量PCR和流式細胞分析技術同樣用于TCR-T臨床試驗中相關免疫治療指標的檢測。